РАХМАНИНА Н.А. - НОВЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ?!

[vikidm]

Вет.клиника при Всероссийском НИИ экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ) на Рязанском проспекте, д. 24, к. 1 Телефон: (495)970-03-61. На прием к глав.врачу Александру Александровичу Шабейкину - он практикующий врач, занимается непосредственно лейкозом. В клинике можно сдать экспресс-тест на лейкоз и есть своя лаборатория (ПЦР)

http://viev.ru/o-viev/struktura-instituta/...a-klinika-viev/
Инфо найдено на Мяу-форуме.

[vikidm]

Что там на буржуйских ВетСайтах СВЕЖЕНЬКОГО ???!
Интересует ноу-хау метод ПЦР-РНК на ВЛК! (и на ВИК тоже!)

ИТАК: Европа отказалась от метода ПЦР-РНК слюны на ВЛК, как несостоятельный!, к. применяют в Зайцев+ по настоянию Рахманиной НА.

Подытожу : на сей день самым правдоподобным методом ПЦР-днк-провирус считают: (Всё подтвержденно письменно у меня на личной почте и по звонку в лабораторию!!!
1. Шанс-Био рекомендуют ПЦР-днк-провирус! Есть ещё Комбо-ИХ-Экспресс ВЛК/ВИК для тех, кому срочно за час нужно соорентироваться что/куда с животным? 80-95%
к осени планируют вводить ПЦР-РНК тесты.
2. НИИ Звенигородка только ПЦР-днк-провирус.
3. Пастер только ПЦР-днк-провирус.
4. Арт-Вет ТРИ метода- ИФА(титры), СНЭП-Экспресс (ИХ) и ПЦР-днк-провирус. Комментировать что-либо не смогли, ПРОСТО НЕ ЗНАЮТ! Изменено 21 августа, 2017 пользователем vikidm

[ficus]

У меня из прочитанного в инете сложилось впечатление, что доктор Рахманина не придерживается принципов доказательной медицины, продвигает российский препарат Форвет с недоказанной эффективностью, на эту тему можно увидеть несколько результатов поиска
https://www.google.ru/search?newwindow=1&am...9k1.8L-x1W9rPlY

Также видела где-то на ветеринарном форуме в ответах для владельцев, что FeLV занимается доктор Фотченкова в БК http://www.bkvet.ru/fotchenkova, если кому-то нужны консультации, видимо, можно попробовать обратиться к ней.
Лекции для специалистов она на эту тему также читает
https://www.facebook.com/events/437732366627284/

3. «Диагностика ВИК и ВЛК, особенности ведения пациентов, в том числе клинически здоровых»

Лектор: терапевт ветеринарной клиники «Белый Клык» Фотченкова Александра Сергеевна

Лекция посвящена такой непростой группе пациентов, как кошки с хроническими вирусными инфекциями.
Все ветеринарные врачи знают, что эту группу болезней сложно достоверно диагностировать и еще сложнее успешно лечить.
Цель лекции: осветить особенности ведения таких пациентов, - как с сопутствующими заболеваниями, так и клинически здоровых.

О текущей точке зрения на диагностику и все остальное можно читать в руководстве Европейской коллегии по болезням кошек, особенно тем, кому профессиональные знания позволяют все это осмыслить. Видимо, для этого все-таки надо быть врачом, с углубленными познаниями в области инфекций и диагностики.
http://www.abcdcatsvets.org/feline-leukaemia-def/
С картинками по ссылке.

Diagnosis




05 FeLV ELISA cartoon ©Hans Lutz

Fig. 13 The principle of an ELISA for antigen detection ©Hans Lutz





04- FeLV SNAP test antigen ©Hans Lutz

SNAP test for FeLV p27 antigen detection©Hans Lutz


Detection of p27 antigen using ELISA





The first p27 ELISA tests were based on polyclonal antibodies; such tests had the advantage of allowing quantitation of p27 but had a tendency to produce false-positive results as the antibodies did not detect only viral proteins but occasionally also non-viral components (Lutz et al., 1980b; Lutz et al., 1980c).


Improved ELISA tests based on monoclonal antibodies to p27 were introduced later to detect p27 capsid protein of exogenous FeLV present in blood or serum (Lutz et al., 1983a; Lutz et al., 1983b). This assay utilises a single monoclonal antibody specific for an epitope (A) of p27 fixed to a solid phase. The serum sample to be tested is mixed with one or two additional monoclonal antibodies specific for epitopes B and C of p27, and the mixture is then added to the solid phase. Hence the presence of p27 leads to insolubilisation of the enzyme-conjugated antibodies and the resulting colour change is indicative for the presence of p27, a marker of infection (but not always of viraemia, as soluble p27 may be detected in the absence of infectious virus). ELISA procedures have the advantage of high diagnostic sensitivity and specificity – which, however, depend on the gold standard used for comparison.




In a field study in which the gold standard was proviral PCR, the diagnostic sensitivity was found to be 90 %, i.e. about 10 % of all 597 cats tested and found to be PCR positive were not recognised by p27 ELISA due to the fact that they are not antigenaemic; the specificity was very close to 100 % in that none of the p27 positive samples turned out to be PCR-negative (Hofmann et al. 2001). If the gold standard is virus isolation, the diagnostic sensitivity is in the range of 90 % and the diagnostic specificity of >98 % (Hartmann et al. 2001).








Fig. 14 The principle of an immune chromatography assay for antigen detection ©Hans Lutz



04- FeLV RIM test antigen ©Hans Lutz

An immunochromatographic practice test for combined FeLV antigen and FIV antibody detection ©Hans Lutz











Fig. 14 The principle of an immune chromatography assay for antigen detection ©Hans Lutz








Detection of p27 antigen using immune chromatography



These tests are based on the same principle as the ELISA but small beads less than one micron in size are coated to the revealing antibodies rather than enzymes. The diagnostic sensitivity and specificity of immune chromatography tests was shown to be comparable to those of the ELISA (Hartmann et al., 2007; Hartmann et al., 2001; Pinches et al., 2007; Robinson et al., 1998; Sand et al., 2010; EBM grade I).







04- FeLV IFA cartoon ©Hans Lutz







Fig. 15 The principle of an immunofluorescence assay for antigen detection in cells ©Hans Lutz



04- FeLV blood smear ©Diane Addie

FeLV blood smear, immunofluorescence test ©Diane Addie




Detection of the gag protein using the immunofluorescence assay (IFA)





The first method that allowed FeLV detection in viraemic cats under field conditions was the indirect IFA, introduced in 1973 (Hardy et al., 1973). It was based on the observation that granulocytes, lymphocytes, and platelets in viraemic cats contain gag components, which may be detected by IFA in blood smears. The diagnostic sensitivity of IFA compared to virus isolation as the gold standard is significantly lower than 100 %; but positive cats are usually persistently viraemic (Hawks et al., 1991; EBM grade I). If a viraemic cat has leukopenia or if only a small percentage of peripheral leukocytes are infected, the presence of FeLV infection may be overlooked using IFA tests. Furthermore, all eosinophils have a tendency to bind the FITC conjugates used for IFA resulting in false positive tests if slides are not read carefully (Floyd et al., 1983).




Virus isolation



Virus isolation in cell culture has been considered to be the ultimate criterion for FeLV infection. (Jarrett 1980; Jarrett et al., 1982). Indeed, in the early phase of infection, detection of infectious FeLV is often the most sensitive parameter (Lehmann et al. 1991). In view of difficult logistics, this test is no longer considered for routine testing.




PCR for the detection of provirus (DNA PCR)



Since every cat cell carries between 12 and 15 copies of endogenous FeLV, it proved difficult to determine sequences specific for detecting exogenous provirus (Jackson et al., 1996). The value of PCR techniques was greatly enhanced by the development of real-time PCR that not only allows detection but also quantitation of FeLV provirus (Hofmann-Lehmann et al., 2001). PCR procedures have the highest analytical and diagnostic sensitivity and a high specificity – provided the tests are run with precautions of clean work, in separate labs, with all necessary controls and under conditions of ”good laboratory practice”.



PCR for the detection of provirus may be useful for the clarification of inconclusive p27 antigen tests.




PCR for the detection of viral RNA



The detection of viral RNA added a new aspect to the diagnosis of FeLV infection (Tandon et al., 2005). Viral RNA present in whole blood, serum, plasma, saliva or faeces is extracted, reverse transcribed into cDNA, which is then amplified by real-time PCR. This technique permits the detection and quantitation of virus in the absence of cells. RNA PCR does not provide the same information as DNA provirus PCR. Many cats that have overcome FeLV viraemia remain provirus-positive but do not possess detectable viral RNA in plasma, saliva or faeces (Gomes-Keller et al., 2006a). However, detection of viral RNA is a reliable parameter of viraemia.



In most situations, individual cats are tested for FeLV infection. However, when the cost of testing is a limitation, pooled saliva samples can be used, as the assay is sufficiently sensitive to detect a single infected cat in a pool of up to 30 samples. This approach may be chosen when screening multicat households (Gomes-Keller et al., 2006b). While all viraemic cats are positive for FeLV RNA in saliva, a few may shed RNA, but are not (yet) viraemic or antigenaemic (Cattori et al., 2009).




Serology



Although antibodies against FeLV can be measured, the results are difficult to interpret because many cats develop antibodies to their endogenous FeLV. Therefore such tests are currently of little clinical value. In some research laboratories, the so-called FOCMA (feline oncornavirus-associated cell membrane antigen) test was used to detect antibodies to what was believed to be a tumour-associated antigen. It was later found that FOCMA was indeed a combination of several viral components; as this test is difficult to establish and to standardise, is not considered to be of clinical value. Virus neutralising antibodies can be measured, but this test is not widely available (except in the UK) and is used infrequently.



The observation that antibodies can develop as the sole parameter of exposure to FeLV (Major et al., 2010) led to the examination of FeLV antigens to assess their diagnostic usefulness. In contrast to published results (Fontenot et al., 1992) a recombinant preparation of FeLV p 15(E) proved highly effective for the detection of antibodies induced by FeLV infection and thus for the diagnosis of undergone previous infection (Boenzli et al., 2014).




Test interpretation



The first test that becomes positive after FeLV infection is usually virus isolation, followed within a few days by DNA and RNA PCR, ELISA, and later by IFA (Hofmann-Lehmann et al 2006). Persistently viraemic cats are usually positive in all tests.



The most widely used in-practice tests are antigen ELISA and immunochromatography. As the prevalence of FeLV infection has decreased in many European countries, also false positive test results tend to increase. Therefore, a doubtful positive result in a healthy cat should always be confirmed, preferably using provirus PCR (DNA PCR) offered by a reliable laboratory. A positive test in a cat with clinical signs consistent with FeLV infection is more reliable, as in sick cats the prevalence of FeLV is considerably higher.



Cats testing positive may overcome viraemia after two to sixteen weeks – in rare cases even later. Therefore, every test-positive healthy cat should be separated and retested after several weeks or months; depending on compliance of the owner, retesting can be done still later (up to one year) when it is highly unlikely that the cat will clear the viraemia.



Cats that clear infectious virus from the plasma will be negative by VI, ELISA, immunochromatography, IFA, and RNA PCR, but will remain positive by DNA PCR (Gomes-Keller et al., 2006a; EBM grade I). These cats should be considered latently infected, although the clinical significance is low in most cats. However, in rare instances, chronic stress, immune suppression or infection with other viruses may lead to reactivation. The mean proviral load in cats that have overcome viraemia is several hundred times lower than in cats with persistent viraemia. A small proportion (2-3 %) of cats remain positive by ELISA and immunochromatography although no infectious virus can be isolated from the plasma. These cats have foci of infection outside the bone marrow from which soluble p27 is released into the circulation; such cats are potential sources of infection (Lutz et al., 1980c).

In summary, cats can be initially tested for p27. If the result is inconclusive for any reason, the test should be repeated by a qualified laboratory, using an alternate format, preferably PCR for provirus.

Свежие исследования можно искать на pubmed.com, если кого-то интересует теория.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=FeLV

Но лучше наверное обращаться к врачам, которые разбираются в проблеме и сами рекомендуют исследования из доступных в России.

[Пегаша]

уважаемые любители животных. делайте упор на клиники, которые следуют принципам доказательной медицины! В Москве это "Белый клык", "Зоостатус", "Чеширский кот", "Джунгли", "Северное сияние", это навскидку, а есть и еще по Москве и подмосковью, эти врачи не назначают вашим животным какие то сомнительные препараты, хотя могли бы (хотя с целью подъема суммы чека), значит они честны с вами, давайте больше поддерживать своим доверием таких врачей и бойкотировать разные фуфломицины!

[vikidm]

Фотченкова АК БК отвечает:

1.- Неужели нужно ещё сдать РНК слюны и крови?
2.- Если "отриц. РНК ни о чем не говорит", зачем его сдавать? может сразу ПЦР-ДНК или Элиза (ИХ) Экспрессы??????
3.- Почему РНК ловит вирус ВЛК вакцинированного от Лейкоза животного ???

1. Достоверность результатов анализов слюны, слезы на влк стоит под большим вопросом по результатом проведенных исследований специфичности и чувствительность нескольких таких тест систем, поэтому этот анализ не рекомендован вовсе. Когда сделают нормальный тест, опубликуют и проверят - тогда его станут использовать.
2. Не знаю зачем, я не сдаю.
3. Я не знаю, ловит ли он рнк вируса или нет. ДЛя этого нужно провести вакцинацию кошек именно этой вакциной и провести им серию пцр рнк исследований в течение какого-то периода, чтобы ответить на вопрос, может ли вакцинацию давать такой результат тест. С контрольной группой. При чем именно этой лаборатории. Никто этого не делал.. Поэтому остается только гадать.
В теории это могло бы давать положительный результат, но это не значит, что так есть на практике. Пишут, что результат ELISA у привитых кошек отрицательный.

Для диагностики я использую разные варианты в зависимости от пациента и вероятности наличия у него влк вовсе. Я стараюсь отправлять анализы в разные лаборатории, чтобы определить для себя лучший вариант. Однако, пока эти попытки также противоречивы..
Многое зависит вообще от анамнеза и вероятности заболеть инфекцией, от других признаков, а не от лаборатории.
Известно, что результаты иммуноферментных тестов (у нас ветэксперт используется как экспресс скрининг) коррелируют с результатами высокоспецифичных и чувствительных ELISA анализов (тоже можно сдать в МСК в нескольких лабораториях), есть исследования, что это так. Поэтому я им доверяю, меня они устраивают как скрининг. Однако при необходимости подтвердить диагноз, что бывает тоже часто, я сдаю ELISA и пцр в другие лабы.

Кошка с ПЦР + может быть незаразна, если у нее регрессивная инфекция.
Кошка с + ИФА И ELISA скорее всего заразна, так как имеет много вируса, обнаруживаемого таким методом. Но перейдя в регрессию она становится незаразной.
Такие данные об этом)
Отрицательный пцр точно не говорит о том, что кошка не выделяет вирус. ПЦР может быть ложноотрицательным запросто. ВЛК и ВИК очень часто мутирующие вирусы, которые анализ может не обнаружить просто из-за изменения последовательности генов вируса вследствие мутаций, которые с ними происходят только так)
Являются ли РНК ПЦР + кошки заразными или незаразными я не знаю. Нет нигде таких данных, не знаю, откуда такие выводы) Кровь заразна, если анализ не ложный. Положительный анализ на рнк вируса же не говорит о том, что инфекция поразила слюнные железы и вирус выделился со слюной и кошка заразна? Он просто нашел вирус и все.
http://www.bkvet.ru/forum/showthread.php?p=75021#post75021 Изменено 21 августа, 2017 пользователем vikidm

[kisskina]

А почему она тесты ветэксперта имуноферментными считает? Во всяком случае на лейкоз у них метод ИХА. Оф. Сайт ветэксперта сей доктор посещать не пробовала?
Вот сами эти тесты хорошие, но и.к. они показывают один и тот же результат с ПЦР ( сдавали ни один раз нескольким в один день), то не вижу смысла переплачивать. Изменено 21 августа, 2017 пользователем kisskina

[vikidm]

А почему она тесты ветэксперта имуноферментными считает? Во всяком случае на лейкоз у них метод ИХА. Оф. Сайт ветэксперта сей доктор посещать не пробовала?
Вот сами эти тесты хорошие, но и.к. они показывают один и тот же результат с ПЦР ( сдавали ни один раз нескольким в один день), то не вижу смысла переплачивать.

Шанс сняли ЭЛИЗА, у них сейчас быстрые ИХ и ....ПЦР-днк. Тоже на памяти раньше Элиза результаты совпадали с ПЦР.
есть Антитела к вирусу лейкоза крс, только мне не понятно зачем они? Изменено 21 августа, 2017 пользователем vikidm

[lenafiber]

Вставлю немного о нас с Евой. Пересдали 06.08.2017 опять ИХА и ПЦР на лейкоз - отрицательно. Дополнительно по рекомендации врача сдали на иммунодефицит - отрицательно.
Я видимо еще долго после Рахманиной буду мучить свою бедную кошку, которая уже от врачей шарахается, сдавая эти анализы, чтобы убедиться, что нам поставили ложный диагноз.
Тут уже в теме очень много про диагностику лейкоза сказано, не пора ли это перенести в соответствующую тему?

[vikidm]

1.6 Диагностика

(Старая информация, но не оспоренная)

Диагностика лейкемии. Лейкоз кошек

1.6.1.1. ИФА (p27)

Первые ИФА тесты, основанные на поликлональных антителах, позволяли количественно определять вирусный белок p27, но имели тенденцию давать ложно-положительные результаты, так как антитела обнаруживали не только вирусные белки, но иногда и не вирусные компоненты [Lutz и др. др., 1980b;.. Lutz и др., 1980c]. Улучшенные тесты были построены на основе твердофазного ИФА и были высокоспецифичны. Однако подтвержденное наличие вирусных белков не означало виремию. Современные ИФА тесты имеют высокую диагностическую чувствительность и специфичность, но нуждаются в подтверждении «золотым стандартом» в диагностике лейкоза. Таким стандартом является ПЦР диагностика на наличие провирусной ДНК. Исследования показали, что диагностическая чувствительность ИФА составляет примерно 90%. То есть примерно 10% кошек оказались позитивными в ПЦР и дали отрицательный результат в ИФА, что говорит об отсутствии антигенемии. Специфичность ПЦР близка к 100%, поскольку каждый позитивный ИФА тест подтвердился в ПЦР (Hofmann et al., 2001). Таким образом, ПЦР обладает диагностической чувствительностью более чем 90%, а специфичность составляет более 98% [Hartmann et al., 2001].

1.6.1.2. Иммунная хроматография

Эти тесты основаны на том же принципе, что и ИФА. Диагностическая чувствительность и специфичность таких экспресс тестов сопоставимы с ИФА [Hartmann et al., 2007; Hartmann et al., 2001; Pinches et al., 2007; Robinson et al., 1998].

1.6.1.3. Иммунофлуоресцентный анализ

Первый метод, который позволил обнаруживать вирус в полевых условиях, был непрямой иммунофлуоресцентный анализ (РНИФ), разработанный в 1973 г. [Hardy и соавт., 1973]. Он был основан на наблюдении, что гранулоциты, лимфоциты и тромбоциты у инфицированных кошек содержат вирусные компоненты, которые могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в мазках крови. Диагностическая чувствительность метода по сравнению с выявлением вируса в ПЦР значительно ниже, но положительный результат, как правило, говорит о стойкой виремии [Hawks et al., 1991]. Если у кошки наблюдается лейкопения или инфицирован небольшой процент лейкоцитов периферической крови, наличие инфекции может остаться незамеченным.

1.6.1.4. Культивирование вируса

Выделение вируса в культуре клеток считалось высшим критерием определения болезни. [Jarrett 1980; Jarrett et al., 1982]. Действительно, на ранней стадии инфекции, выявление инфекционных частиц часто является наиболее чувствительным методом (Lehmann и соавт., 1991). С учетом сложной логистики, этот тест уже не используется для рутинных исследований.

1.6.1.5. ПЦР для обнаружения провируса (ДНК)

Так как каждая клетка кошки содержит от 12 до 15 копий генетического материала эндогенных вирусов FeLV, оказалось довольно трудно определить последовательности, специфичные для экзогенного провируса [Jackson et al., 1996]. Значение метода ПЦР в значительной степени возросло с появлением ПЦР в реальном времени, которая позволяет проводить количественный анализ провируса [Hofmann-Lehmann et al., 2001]. ПЦР анализ имеет самую высокую аналитическую и диагностическую чувствительностью с учетом того, что все лабораторные исследования выполняются в соответствии со всеми требованиями и в надлежащих условиях.

Проведение ПЦР для выявления провируса может быть полезным у кошек с отрицательным иммунохроматографическим тестом.

Диагностика лейкемии. Лейкоз кошек. ПЦР анализ

1.6.1.6. ПЦР для обнаружения вирусной РНК

Выявление вирусной РНК стало новым аспектом в диагностике лейкоза [Tandon et al., 2005]. С помощью этого теста возможно обнаружить и провести количественный анализ вирусной РНК в цельной крови, сыворотке, плазме, слюне или фекалиях. Выявление РНК в ПЦР не дает ту же информацию, что и определение ДНК провируса. Достаточно много кошек, иммунная система которых преодолела виремию, но, тем не менее, они будут положительными на наличие провируса. У таких животных РНК вируса не будет определяться в крови, слюне и фекалиях [Gomes-Keller et al., 2006a]. Обнаружение вирусной РНК является надежным показателем вирусемии.

В большинстве случаев ПЦР анализ проводится индивидуально. Тем не менее, в определенных условиях, когда стоимость анализа высока, например, для тотального тестирования кошек в питомнике, можно использовать ПЦР для исследования объединенных проб, так как тест достаточно чувствителен для выявления одной инфицированной кошки в 30-ти объединенных пробах [Gomes-Keller et al., 2006b].

1.6.2. Косвенные методы обнаружения

Несмотря на то, что возможно определять антитела к вирусу FeLV, результаты такого анализа трудно интерпретировать, так как много кошек имеют антитела к эндогенному вирусу. Поэтому такие тесты в настоящее время не имеют клинического значения.

Есть тесты на вирус нейтрализующие антитела, но они не получили широкого распространения (в основном, используются в Великобритании).

1.6.3. Интерпретация результатов исследований

Первый тест, который будет положительным практически сразу после заражения, это выделение вируса на культуре клеток. Спустя нескольких дней после заражения для диагностики возможно использовать ПЦР для выявления ДНК и РНК, а затем ИФА [Hofmann-Lehmann et al 2006]. Кошки с устойчивой виремией, как правило, дают положительный результат по всем тестам.

Наиболее широко используемые тесты для диагностики инфекции FeLV на практике – это иммунохроматографические экспресс тесты для определения антигена. Распространение лейкоза кошек постепенно сокращается, однако во многих европейских странах существует тенденция к увеличению ложно положительных результатов. Поэтому сомнительный и положительный результат у здоровой кошки должен быть всегда подтвержден, желательно с использованием ПЦР. Положительный результат у кошки с клиническими признаками инфекции является более надежным, поскольку у таких животных распространение вируса, вероятно, будет значительно выше.

Кошки с положительным результатом могут преодолеть виремию в течение 2-16 недель, в редких случаях дольше. Поэтому каждая положительно реагирующая кошка без клинических признаков должна быть изолирована и через несколько недель или месяцев исследована повторно.

Кошки, у которых вируса нет в крови, дадут отрицательные результаты в ИФА, иммунохроматографии и в ПЦР при определении РНК, однако будут позитивными при выявлении провируса [Gomes- Keller et al., 2006a]. Таких кошки следует считать латентно инфицированными, хотя клиническая значимость в большинстве случаев будет низкой. Тем не менее, в редких случаях, хронический стресс, подавление иммунной системы или ко-инфекции могут привести к реактивации вируса. Средняя нагрузка провируса у кошек, преодолевших виремию в несколько сотен раз ниже, чем у кошек с устойчивой виремией. Небольшая часть кошек (2-3%) все же остаются положительными в ИФА и иммунохроматографии. У этих животных очаги инфекции находятся за пределами костного мозга. Такие кошки должны рассматриваться в качестве потенциального источника инфекции [Lutz и др.., 1980c].

Таким образом, первоначально кошек можно проверить иммунохроматографией на наличие вирусного белка р27. Если результат окажется отрицательным по любой причине, тест необходимо повторить в квалифицированной лаборатории, используя альтернативный формат – ПЦР для выявления провируса. Изменено 21 августа, 2017 пользователем vikidm

[vikidm]

БЫСТРЫЕ ТЕСТЫ ИХ:
Принцип: ИХА прямым сэндвич методом
ВЕТ-ЭКСПЕРТ
─ Специфический антиген - Протеин A, конъюгированный с золотом (Обнаружение)<–> Антитела против FIV в образце <–> Рекомбинантный антиген (Связывание)
─ Моноклональные антитела против FeLV (связывание) <–> FeLV антиген в образце<–> Моноклональные антитела против FeLV (обнаружение) против FeLV (обнаружение)

● Назначение: Выявление антител против вируса иммунодефицита и антигена вируса лейкемии кошек

● Образцы: сыворотка или плазма крови кошек

● Чувствительность : FIV : 96.8 % по сравнению с Western blot, FeLV: 100% по сравн. с PCR
производитель утверждает, что чувствительность к FeLV - 100%

● Специфичность : FIV : 99.6 % по сравнению с Western blot, FeLV: 100% по сравн. с PCR

● Время считывания : 5 - 10 минут

Я так понимаю, это и ИХ-экспресс-тест (Лаба) и Вет-Эксперт (полоска).
Форумчане, поделитесь результатами из своего опыта?



ВетМедикал: "Антон Валерьевич, а по поводу методов ПЦР-днк(провирус) и ПЦР-РНК что можете сказать? РНК используете в своей практике?"

ПЦР и ИФА диагностика думаю будут по точности лучше, но вам же надо быстро?
ПЦР и ИФА делаются(если отдавать в лабораторию) примерно 2-3 дня. тест-полоски это выбор, в вашем случае (быстро) Изменено 25 августа, 2017 пользователем vikidm

[dadalan]

БЫСТРЫЕ ТЕСТЫ ИХ:
Принцип: ИХА прямым сэндвич методом
ВЕТ-ЭКСПЕРТ
─ Специфический антиген - Протеин A, конъюгированный с золотом (Обнаружение)<–> Антитела против FIV в образце <–> Рекомбинантный антиген (Связывание)
─ Моноклональные антитела против FeLV (связывание) <–> FeLV антиген в образце<–> Моноклональные антитела против FeLV (обнаружение) против FeLV (обнаружение)

● Назначение: Выявление антител против вируса иммунодефицита и антигена вируса лейкемии кошек

● Образцы: сыворотка или плазма крови кошек

● Чувствительность : FIV : 96.8 % по сравнению с Western blot, FeLV: 100% по сравн. с PCR
производитель утверждает, что чувствительность к FeLV - 100%

● Специфичность : FIV : 99.6 % по сравнению с Western blot, FeLV: 100% по сравн. с PCR

● Время считывания : 5 - 10 минут

Я так понимаю, это и ИХ-экспресс-тест (Лаба) и Вет-Эксперт (полоска).
Форумчане, поделитесь результатами из своего опыта?



ВетМедикал: "Антон Валерьевич, а по поводу методов ПЦР-днк(провирус) и ПЦР-РНК что можете сказать? РНК используете в своей практике?"

ПЦР и ИФА диагностика думаю будут по точности лучше, но вам же надо быстро?
ПЦР и ИФА делаются(если отдавать в лабораторию) примерно 2-3 дня. тест-полоски это выбор, в вашем случае (быстро)

Что в итоге? Что (метод) и где (лаборатория) сдавать на вялотекущие для новых, не имеющих клин. признаков заболеваний? Кого из врачей советуете?

[vikidm]

ПОКА по отзывам Лаборантов - на первом месте ПЦР-днк
на ВЛК - ПЦР-днк-провирус и дублируем ИХ (АГ) (антиген)
на ВИК - ПЦР-днк-провирус ИЛИ ИХ (АТ) (антитела). т.е. АТ тоже показывает очень высоко к 100%

Если БЫСТРО нужно узнать- ВетЭксперт полоски, или ИХ-экспресс (комбо ВЛК и ВИК) , но нужно через дней 10 подтвердить ПЦР.

А респиратурные, кишечные- сторого ПЦР-днк
Короновирус можно полоска ВетЭксперт или ТИТРЫ к Короне, чтобы знать насколько коша знакома с вирусом.

ЛАБЫ- НИИ Звенигородка, Шанс-Био, Неовет.....
Врачей, спец. на вирусах не так много, напр. БК Фотченкова, Скороходов....
Здесь важно выбрать врача супер-практикующего, например Скороходов явл. ещё врачом-куратором Приютов для бездомных, т.е. лечит не по книжкам, А ИЗ ЖИЗНИ.

Что в итоге? Что (метод) и где (лаборатория) сдавать на вялотекущие для новых, не имеющих клин. признаков заболеваний? Кого из врачей советуете?

Изменено 14 сентября, 2017 пользователем vikidm

[vikidm]

КОРОНОВИРУС. Удачная статья, и прекратите лечить ТО, что не подлежит лечению, хватит лечить ТИТРЫ.
http://zoostatus.ru/lechenie/bolezni-koshe...virus-u-koshek/

СТРЕСС- это не вакцинация и стерилизация, а
- ненадлежащее содержание
- лечение здоровой кошки иммуномодуляторами, с недоказанной эффективностью, и прочими табами и уколами.

[tutor]

Нам посоветовали обратиться к Рахманиной с котенком, которому по анализам сказали - ФИП. Брали жидкость из брюшной полости. Сегодня взяли еще кровь. Пока наблюдается в клинике Воронцова.

Поняла, что к ней не стоит. А к кому?

[lenafiber]

Да, к ней многие ходят насчёт короны и ФИПа. Но, к сожалению, ФИП не лечится. И ни один врач Вам котёнка не вылечит, если диагноз верный. Не знаю, насколько может Рахманина продлить жизнь животному и будет ли это полноценная жизнь или научный эксперимент с новыми лекарствами. Тут надо думать, что гуманнее.
Для подтверждения диагноза можно и к ней, а можно к Скороходову в Северное сияние. Он не экспериментатор всякого разного, но очень грамотный врач.

[tutor]

Да, к ней многие ходят насчёт короны и ФИПа. Но, к сожалению, ФИП не лечится. И ни один врач Вам котёнка не вылечит, если диагноз верный. Не знаю, насколько может Рахманина продлить жизнь животному и будет ли это полноценная жизнь или научный эксперимент с новыми лекарствами. Тут надо думать, что гуманнее.
Для подтверждения диагноза можно и к ней, а можно к Скороходову в Северное сияние. Он не экспериментатор всякого разного, но очень грамотный врач.

Спасибо!
Котенок, ттт, кушает, играет, бегает. 5 дней назад жидкость в животе появилась.
Сегодня-завтра собираю информацию.

[ingrid007]

Здесь важно выбрать врача супер-практикующего, например Скороходов явл. ещё врачом-куратором Приютов для бездомных, т.е. лечит не по книжкам, А ИЗ ЖИЗНИ.

Рахманина также экспериментирует с приютскими и что, это делает ее толковым врачем?

..жидкость в животе появилась.
Сегодня-завтра собираю информацию.

Жидкость появляется в брюшине/грудине при ЛЮБОМ воспалительном процессе, исключите сначала прочие заболевания.

[ficus]

Да, к ней многие ходят насчёт короны и ФИПа. Но, к сожалению, ФИП не лечится. И ни один врач Вам котёнка не вылечит, если диагноз верный. Не знаю, насколько может Рахманина продлить жизнь животному и будет ли это полноценная жизнь или научный эксперимент с новыми лекарствами. Тут надо думать, что гуманнее.
Для подтверждения диагноза можно и к ней, а можно к Скороходову в Северное сияние. Он не экспериментатор всякого разного, но очень грамотный врач.

К Рахманиной не следует обращаться, если хотите получить диагноз и лечение в соответствии с принципами доказательной медицины, только теми препаратами, эффективность которых доказана.
Она продвигает российский препарат Форвет с недоказанной эффективностью, на эту тему можно увидеть несколько результатов поиска
https://www.google.ru/search?newwindow=1&am...9k1.8L-x1W9rPlY
И в частности поиском найдите "Бесплатный онлайн-вебинар "Коронавирусная инфекция кошек ..." и мнения врачей на 10 страницах.

Для постановки диагноза нужен врач.
Скороходов В.А. занимается инфекционными заболеваниями и придерживается принципов доказательной медицины http://vc-ss.ru/, доктор Фотченкова тоже http://www.bkvet.ru/fotchenkova. Еще в БК доктор Прокофьева вдумчиво относится к диагностике пациентов с выпотом http://www.bkvet.ru/prokofieva. На сайте у них у обеих инфекционные заболевания - в списке профессиональных интересов. Скороходов в Сокольниках, Прокофьева в Строгино, Фотченкова на Пресне.

Посмотрите ответы Сятковской О.С. по поиску "жидкость" и по автору LadyFelino просто для информации, она не принимает в Москве.
http://zooforum.ru

[lenafiber]

О чем я и говорю, что если хотите стать объектом эксперимента - можно и к Рахманиной, она будет всё подряд пробовать и может что-то из этого и продлит немного жизнь животному, но чего это будет стоить животному... большой вопрос. Даже когда она поставила моей кошке смертельный диагноз, я для себя сразу решила, что не буду пичкать мою Еву лекарствами и пусть живет, сколько проживет. Но люди все разные и для кого-то такой врач-экспериментатор может будет последней инстанцией.
Как тут посоветовать нормального врача? Знает хоть кто-нибудь на форуме того врача, который вылечит ФИП? Думаю нет. Он не излечим. Надо конечно подтвердить диагноз, а он очень сложен в диагностике, и как правило, с точностью его можно поставить только посмертно.
Если говорить о хороших врачах, то я думаю это те (перечислю не всех, так как посетила я их гораздо больше), у которых я побывала с Евой:
Благодарова
Фотченкова
Скороходов
Кусенкова
Лабынцева.
Все они очень хорошие специалисты, на мой взгляд. Но кто из них точно диагностирует ФИП - мне кажется вероятность у всех одинаковая.
Если кто-то в теме знает специалиста, который 100% диагностирует или лечит ФИП - поправьте меня.
И котенку Вашему желаю всех благ и долгих лет жизни! Один котик мне знаком, у которого была жидкость в брюшине, титры большие по короне и куча всего, и которому поставили под вопросом ФИП, но всё обошлось и кот жив, здоров, слава Богу. Надеюсь у котенка совершенно другая причина, которая излечима.

[ficus]

Если говорить о хороших врачах, то я думаю это те (перечислю не всех, так как посетила я их гораздо больше), у которых я побывала с Евой:
Благодарова
Фотченкова
Скороходов
Кусенкова
Лабынцева.
Все они очень хорошие специалисты, на мой взгляд. Но кто из них точно диагностирует ФИП - мне кажется вероятность у всех одинаковая.
Если кто-то в теме знает специалиста, который 100% диагностирует или лечит ФИП - поправьте меня.

ФИП не лечится, 100% точность диагноза достигается только путем вскрытия, так что для 100% точного диагноза надо уже патологоанатомов рекомендовать, в то время как у кота может быть заболевание, поддающееся лечению.
Из перечисленных Вами - Кусенкова - известный врач - нефролог и эндокринолог в первую очередь. Лабынцеву не знаю, но вижу, что у нее офтальмология указана как сфера профессиональных интересов, а инфекции - не указаны. http://med-vet.ru/vrachi/rukovoditeli-podr...nika-andreevna/. Благодарова ставила диагноз ФИП 2 моим бывшим подопечным кошкам на основании выпота, но это был не ФИП в результате. Первый раз к ней владельцы обратились и перешли от нее к другому врачу, второй раз забылись и снова обратились и тоже перешли потом к другому доктору, выпот был, ФИПа не было. Как терапевта ее хвалят многие, но для подтверждения или исключения ФИП лично я исходя из этого опыта не рекомендую.
Скороходов, Фотченкова - поддерживаю Вашу рекомендацию.

[ingrid007]

Если говорить о хороших врачах, то я думаю это те (перечислю не всех, так как посетила я их гораздо больше), у которых я побывала с Евой:
Благодарова
Фотченкова
Скороходов
Кусенкова
Лабынцева
Все они очень хорошие специалисты

Кусенкова не спец по инфекциям, также как и Благодарова.
Особенно хотелось бы Лабынцеву "отрекомендовать" - бездарь и неуч.
Остальных не знаю.

[vikidm]

Написала Врачу в личку, может быть... будет времечко, окажет нам внимание.....

Владислав Анатольевич (Скороходов), пожалуйста, ПОГОВОРИТЕ С НАМИ!!!!

Если с ВИК как-то всё пока понятно, то с Диагностикой ВЛК –нет!
Обычно как происходит:
- наблюдающий врач по аказии просит здоровое домашнее животное (или не нравится ОКА) сдать на ВЛК. В этом случае выбирают ПЦР-ДНК + ИХ.
- Кошка «поднятая с улицы» тоже сдаёт Комбо (ВЛК/ВИК) ИХ, и повторяет через 10-30дн.ПЦР-ДНК.

ЧТО ОБЫЧНЫМ ВЛАДЕЛЬЦАМ КОШЕК ДЕЛАТЬ, ЕСЛИ ВРАЧ ИЛИ ЛАБОРАНТ ПРЕДЛОЖИТ СДЕЛАТЬ ТЕСТ МЕТОДОМ ПЦР-РНК, и ОН ОКАЖЕТСЯ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ, ПРИ ОТРИЦАТЕЛЬНОМ ПЦР-ДНК, ИХ ИЛИ ИФА ???
ЧТО ДЕЛАТЬ, ЕСЛИ ВРАЧ НАЗНАЧИТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ, НА ОСНОВАНИИ РНК+ ???

Все мы знаем, что вирус лейкоз зафиксирован у львов и тигров в 60-е годы, из Сайта http://www.abcdcatsvets.org/feline-leukaemia-def/
« в крови кошки много частиц, содержащих набор РНК вируса Лейкоза, но не все они патогенные, и могут реплицироваться».
Так неужели кошки являются наследниками вир.лейкоза львов и тигров?
Как к этому относиться, если у кошки РНК положительно, а ДНК отрицательно?
Она здорова?
Можно ли брать в семью Второго животного?


Зайцев+
-Вирус иммунодефицита кошек (FIV) РНК
-FIV вирусная нагрузка (РНК)
-Вирус лейкемии кошек (FeLV) РНК
-FeLV вирусная нагрузка (РНК)

"Для наиболее достоверной диагностики вирусной лейкемии кошек лучше всего использовать метод ПЦР, т.к. он наиболее чувствительный. Но необходимо подходить комплексно, т.е. определять провирусную ДНК в крови, РНК в крови и РНК в слюне. Главное! С уверенностью можно будет сказать, что животное больно, если РНК будет обнаружен в слюне или ДНК в крови.
Вирусная нагрузка - это определение числа копий РНК либо в крови, либо в слюне. Если ДНК не обнаружен, к сожалению, исключить заболевание нельзя, т.к. возможно вирус ещё не успел встроиться в геном хозяина (кошки). Таков патогенез этого заболевания.

При вакцинации геном, похожий на геном заболевания (сейчас мы говорим об ВЛК) попадает в организм животного, вызывая иммунный ответ (выработку антител). При этом сам вирус НЕ размножается, т.е. число копий РНК остаётся низким и неизменным. Поэтому большое число копий при проведении анализа будет свидетельствовать о том, что это всё-таки инфекция, а не вакцинация.
С уважением,
Зайцев+
-------------------------------------
"В мире не существует 100% методов диагностики, как бы нам не хотелось. Всегда есть вероятность ошибки, хоть и ничтожная. Что касается диагностики ВЛК, то для повышения достоверности стоит исследовать двумя методами: и ПЦР на провирус (ДНК) и ПЦР, выявляющую РНК. Провирус ДНК выявляется после заражения вирусом лейкоза костного мозга кошки, и часто бывает ситуация, когда ПЦР на провирус дает нам положительный результтат, а ПЦР на РНК вируса дает отрицательный, это означает, что кошка вирусом заражена, но виремии и размножения вируса в данный момент не происходит. Бывает ситуация, когда ПЦР на РНК положительна (или ИФА на антиген), а ПЦР на провирус отрицательна, это означает, что у кошки в данный момент наблюдается первичная виремия, и костный мозг еще не заражен, следовательно клетки-предшественники костного мозга еще не дают зрелых клеток крови, зараженных вирусом. Такая ситуация наблюдается редко, поскольку при первичной виремии не всегда владельцы замечают недомогание у кошки.
В случае подобранной кошки я бы посоветовала для начала сдать ПЦР на провирус, если это просто проверка и животное хорошо себя чувствует.
Что касается проведения ПЦР на РНК вируса из слюны, то я не обладаю сведениями о недоказанности метода, наоборот, я читала статьи авторитетных в данной области авторов, где пишут, что это хороший вариант выявления заразных кошек в приютах и питомниках, поскольку кошка с виремией достаточно активно выделяет вирус со слюной (именно слюна является источником заражения), и проще отобрать образцы слюны, чем крови у всех кошек.
--
С уважением,
Крылова Дарья Дмитриевна,
зав. отделом молекулярно-генетической диагностики
Независимой Ветеринарной Лаборатории "ПОИСК" С-Петербург
-----------------------------------------------------------------------------------------
"Обнаружение в крови кошки ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в организме животного есть этот вирус и в данный момент выделяется в окружающую среду (т.е. животное является источником заражения для других животных).
Обнаружение в крови кошки ПЦР-про- ДНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в крови животного есть этот вирус и животное может быть как носителем этого вируса, так и выделять вирус в окружающую среду.
Если ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, не обнаружен в крови, то это не говорит об отсутствии вируса в организме, говорит только о том, что в данный момент кошка не выделяет вирус лейкоза в окружающую среду.

С уважением,
Лаврова Е.А.
Лаборатория "Шанс Био" Изменено 19 сентября, 2017 пользователем vikidm

[lenafiber]

1. Владислав Анатольевич мне на приеме говорил, что он давно уже на форум не заглядывает и не думаю, что даже если зайдет, он будет комментировать что-то в теме Рахманиной и Кибелы. Надо выносить наверное это всё в новую тему диагностики ВЛК.
2. Про Ваш вопрос "что делать обычным владельцам кошек" - я думаю постоянно и ответ у меня точно есть: не ходить к Рахманиной Н.А., тогда не будет у ваших животных лейкоза. Вот реально, сейчас в Москве, кроме Зайцев+ и Рахманиной никто этот анализ не назначает и не выполняет. Вывод очевиден - больше нигде и никто пока это исследование не предложит. Не сходи я тогда к ней - жила бы спокойно и не мучала кошку.
3. По ответу Зайцев+. Думаю все участники темы понимают мои чувства, когда речь заходит про эту лабораторию. Но повторюсь наверное. Когда я им звонила по результатам этого анализа, в трубку мне ничего разумного не отвечали, а посылали к врачу (Рахманиной) за всеми расшифровками. Хотя сама врач на первичном приеме мне сказала, что лаборатория сама там разберется, как нам провести исследование, зная что кошка после прививки. По факту получается на тот момент, когда они брали анализ, ни врач, ни лаборатория понятия не имели, как ПЦР РНК реагирует на прививку, т.к. таких исследований никто не проводил. И первые дни они мычали невнятно, а потом видимо "супер-врач" им по своему усмотрению рассказала, что нужно отвечать клиенту. И мы выслушали абсолютно идентичные заученные фразы с двух сторон, что "кошка больна, идите лечитесь".
Я считаю, в этой лаборатории работают неучи, которые твердят то, что им врач надиктовал, причем постоянно меняя свои показания. Мы совершенно не знаем, на каком оборудовании и как они вообще этот анализ выполняют, мы не знаем, какова вообще статистика определения ВЛК на их оборудовании (ну то есть нет информации, что было проверено у них столько-то точно здоровых кошек и ПЦР РНК в этом случае был меньше 500 копий на мл, и было исследовано столько-то кошек точно болеющих ВЛК и ПЦР РНК показал у каждой в крови больше 500 копий на мл). Мы не знаем, сертифицирован ли вообще этот анализ, кто из их лаборантов и где (самое интересное) обучился его выполнять.
4. Про диагностику слюны Фотченкова А.С. нам уже отвечала, что это еще не доказано, так что их текст про слюну - тоже больше теория.
5. Теперь насчет этого текста: "При вакцинации геном, похожий на геном заболевания (сейчас мы говорим об ВЛК) попадает в организм животного, вызывая иммунный ответ (выработку антител). При этом сам вирус НЕ размножается, т.е. число копий РНК остаётся низким и неизменным. Поэтому большое число копий при проведении анализа будет свидетельствовать о том, что это всё-таки инфекция, а не вакцинация."
тут просто ВАУ, как мы запели! Значит все-таки может ПЦР РНК определять вирус после вакцины. Но возникает логичный вопрос, а что тут много и мало, низкое число копий и большое? Ответа у лаборатории нет - они не знают, знает типа врач. А откуда она знает, если нет статистики? Откуда там записи какие-то в ее журнале? Лично мое мнение такое: кто-то в этой лаборатории, если я не ошибаюсь, работал раньше в лабе по диагностике гепатитов и ВИЧ. Так вот вирусная нагрузка пришла как раз оттуда. Наверное так и родилась идея, выполнять вирусную нагрузку на ВЛК и ВИК, по аналогии с гепатитами и ВИЧ. Если опираться на статистику гепатитов, то показатели вирусной нагрузки значением 10 в третьей и менее считаются очень низкими и неактивными. На приеме у Рахманиной она глядя в свой журнал мне сказала: "Ой, ну 2000 копий (у нас было 2 на 10 в третьей) это очень мало, считайте почти ничего и нет". А у котенка (второго пациента Рахманиной) было вообще 900 копий на мл. Во всем этом чувствуется какой-то подвох: зачем тогда что-то лечить, если вирус не реплицируется, если он не активный?

[ficus]

Поддержу п. 1 и то же самое писала Вике в личку. Неэтично призывать врачей писать в этой теме и в целом на форуме, который покинули все врачи, кроме тех, кто занимается стерилизацией или пытается привлечь к себе на обслуживание клиентов. Если у врачей есть свои форумы на сайтах клиник, можно те же вопросы задавать там и копировать сюда, вместо того, чтобы ждать, что они будут писать на разных ресурсах и тем более приходить специально на эти русурсы поговорить с теми, кто не всегда способен даже соблюдать элементарную вежливость при общении в интернете. Викуша, тебе спасибо, что пытаешься для всех разобраться в вопросах.🌹

[vikidm]

Фотченкова АС о методе ПЦР-РНК (форум БК) http://www.bkvet.ru/forum/showthread.php?p=76056#post76056

Здравствуйте.
Ваши вопросы стоит задать тому врачу, что назначает эти анализы и препараты, а не мне.
Данные исследований немного разнятся. Но в них результаты пцр днк и пцр рнк коррелируют. Пцр рнк может обнаруживать еще не реплицирующийся вирус, предполагается. Но бывает и отрицательные пцр рнк при положительном пцр днк.

Возможно, Вам поможет инфо из этой статьи Development and application of a quantitative real-time PCR assay to detect feline leukemia virus RNA, Andrea N. Torres, Kevin P. O’Halloran, and Edward A. Hoover

Я же считаю эти обсуждения довольно бессмысленными, так как указанные вами лаборатории мы не можем проверить, как это следовало бы сделать (например, как в этом исследовании), чтобы понять чувствительность и специфичность метода, предлагаемого ими, в сравнении с золотым стандартом на больных и контрольных животных.
Метод (ПЦР-РНК) не рекомендован как основной нигде.

Фотченкова АС (форум БК) Изменено 20 сентября, 2017 пользователем vikidm